تهیه و خالص سازی آنتی ژن های کرم بالغ فاسیولاهپاتیکا جهت تشخیص فاسیولیازیس

زمینه و هدف: فاسیولیازیس، یکی از بیماری های مهم انگلی انسان و دام است که توسط گونه های فاسیولا در میزبان ایجاد می شود. تقریباً 4/2 میلیون نفر در جهان به این انگل مبتلا هستند و 180 میلیون نفر، در معرض خطر ابتلا هستند. تشخیص بموقع و درمان سریع آن، از بروز عوارض بیماری در مبتلایان بطور چشمگیری جلوگیری می نماید. به همین جهت در مطالعه حاضر نسبت به جداسازی، خالص سازی و ارزیابی آنتی ژن مناسب و بکارگیری آن در روشهای سرولوژیک حساس و اختصاصی اقدام شد. روش بررسی: در این مطالعــه، ابتدا کرمهای سالم جمع آوری شدند، سپس کوتیکول و سایر ارگان های آنها تفکیک شده، آنگاه به صورت جداگانه، هموژنیزه وسونیکه شدند. میزان پروتئین آنها به روش برادفورد اندازه گیری شده و کلیه نمونه ها، تغلیظ شدند و بر روی ستــون ژل کروماتوگرافی(سفادکس g200) بــرده شدنــد. برای هر قسمت، 4 جزء آنتی ژنیک دریافت شد. آنگاه با اولترافیلتراسیــون پروتئیــن، نمونه ها به میــزان مناسب رسانــده شدنــد. با آنتی ژن بدست آمده، 36 راس خرگوش مصون شدند، آنتی سرم بدست آمده از خرگوش ها به همراه 30 نمونه سرم انسان مشکوک به ابتلاء به فاسیولیازیس، به روش ciep(counterimmuno-electrophoresis) آزمایش شدند. در این مطالعه، آنتی ژن جزء 2(fraction 2) کوتیکول فاسیولا هپاتیکا، حساسیــت 9/90% و اختصاصیــت 4/94% را در تســت ciep نشــان داد. آنگاه آنتی ژن مذکور با روش sds-page(sodium dodecyl sulphate-polyacryl amide) شناسایی شد که تنها یک باند مشخص 60 کیلودالتونی داشت؛ در طول ژل، باند دیگری مشخص نگردید؛ این آنتی ژن، با روش الایزا مورد آزمایش قرار گرفت. در این روش، آنتی بادی در نمونه سرم 26 نفر از 30 انسان و همه 36 راس خرگوش، قابل تشخیص و اندازه گیری بود. نوع مطالعه، راه اندازی یک روش یا سیستم علمی بود که تجزیه و تحلیل اطلاعات آن با استفاده از آزمون همبستگی به روشspss انجام شد. یافته ها: در مجموع با روش ciep، از مجموع 66 نمونه سرم(30 نمونه سرم انسان و 36 نمونه سرم خرگوش)، در 60 مورد (آنتی ژن حاصل از کوتیکول فاسیولا هپاتیکا) واکنش رسوبی مثبت مشاهده گردید، در حالی که با روش الایزا، 62 نمونه سرم از 66 نمونه، جواب مثبت داشته است. نتیجه گیری: بنابراین استفاده از آنتی ژن 60 کیلودالتونی کوتیکول کرم فاسیولا به عنوان آنتی ژن خالص، در تستهای سرولوژیک ciep والایزا توصیه می شود. نتایج حاصل، بیانگر حساسیت بالای روش الایزا نسبت به روش ciep می باشد.